Técnica estéril na reconstituição de peptídeos
A técnica estéril na reconstituição de peptídeos protege duas coisas: o peptídeo no frasco e a validade dos seus resultados. Uma solução de peptídeo reconstituída é aberta repetidamente ao longo de várias semanas. Cada punção da tampa é uma chance para bactérias, esporos de fungos, poeira ou células da pele entrarem. Uma vez lá dentro, eles crescem, consomem o peptídeo e liberam enzimas e endotoxinas que distorcem qualquer ensaio. Este guia descreve um fluxo de trabalho asséptico prático para um laboratório de pesquisa, os materiais necessários, as fontes comuns de contaminação e o padrão que define uma boa prática.
Técnica estéril na reconstituição de peptídeos
A técnica estéril na reconstituição de peptídeos protege duas coisas: o peptídeo no frasco e a validade dos seus resultados. Uma solução de peptídeo reconstituída é aberta repetidamente ao longo de várias semanas. Cada perfuração da rolha é uma chance para bactérias, esporos de fungos, poeira ou células da pele entrarem. Uma vez lá dentro, eles crescem, consomem o peptídeo e liberam enzimas e endotoxinas que distorcem qualquer ensaio. Este guia descreve um fluxo de trabalho asséptico prático para um laboratório de pesquisa, os materiais necessários, as fontes comuns de contaminação e o padrão que define a boa prática.
Por que a técnica estéril importa na reconstituição de peptídeos
Peptídeos liofilizados são enviados em frascos selados que foram envasados em condições controladas. O risco começa quando você abre o sistema. Você adiciona solvente através da rolha, retira solução através da rolha, e faz ambas as coisas em uma bancada com ar, poeira e superfícies cheias de microrganismos. A água bacteriostática contém 0,9% de álcool benzílico, que retarda o crescimento bacteriano, mas não elimina tudo e não tem efeito algum sobre enzimas que já estejam no frasco.
Austin e Elia revisaram os dados publicados sobre contaminação microbiana de doses preparadas assepticamente no Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences em 2009 (DOI 10.18433/J3JP4B). Preparações feitas em ambiente não controlado foram contaminadas com muito mais frequência do que as feitas em capela de fluxo laminar ou sala limpa. O ambiente e a técnica, e não o solvente, determinam se um frasco permanece limpo.
USP 797 como padrão de referência
A Farmacopeia dos Estados Unidos publica o padrão para preparações estéreis no Capítulo Geral 797 da USP. Ele foi escrito para farmácias, não para laboratórios de pesquisa, e muitos de seus requisitos, como salas limpas certificadas e monitoramento ambiental, vão além do que um ambiente de pesquisa precisa. Ainda assim, é a melhor referência porque descreve a lógica do trabalho asséptico: limpar as mãos, limpar as superfícies, controlar o ar, desinfetar todos os sítios críticos, nunca tocar em nada que vá entrar em contato com o produto e limitar o tempo em que uma preparação é mantida. As seções sobre higiene das mãos, paramentação, desinfecção de sítios críticos e data de uso após preparo são diretamente úteis.
Preparando uma área de trabalho limpa
O local ideal é uma capela de fluxo laminar. Se você não tiver uma, escolha uma bancada longe de portas, janelas, pias e circulação de pessoas, e desligue ventiladores que soprem sobre a superfície. Em seguida, prepare o espaço:
Esvazie a bancada de tudo que não é necessário para a tarefa.
Limpe a superfície com álcool isopropílico 70% e deixe secar.
Lave as mãos com sabão por pelo menos 30 segundos e seque-as com papel toalha limpo.
Calce luvas de nitrila novas e passe álcool nas luvas.
Prenda o cabelo e use jaleco com mangas fechadas.
Disponha todos os materiais antes de abrir qualquer coisa.
Não converse, não tussa e não se debruce sobre os materiais abertos.
Materiais para a reconstituição estéril de peptídeos
Tudo que tocar o solvente ou a solução deve ser estéril e usado uma única vez. A lista é curta:
Seringas estéreis descartáveis em um tamanho compatível com o volume, por exemplo 1 mL ou 3 mL. Abra a embalagem somente imediatamente antes do uso.
Agulhas estéreis descartáveis, uma para retirar o solvente e uma nova para cada retirada posterior. Uma agulha já usada uma vez não é mais estéril.
Swabs estéreis com álcool, embalados individualmente.
Água bacteriostática em frasco multidose selado, como nossa água bacteriostática 10 mL. A linha completa de solventes e consumíveis está na nossa coleção água bacteriostática e suprimentos de laboratório.
Um filtro de seringa estéril de 0,22 µm, opcional, para soluções que serão usadas em cultura celular ou armazenadas por mais tempo.
Etiquetas, marcador permanente e um recipiente para perfurocortantes.
Nunca reutilize uma seringa, mesmo para o mesmo frasco no mesmo dia. Nunca toque no corpo da agulha, na ponta da seringa ou no interior de uma tampa. Essas superfícies são chamadas de sítios críticos e devem entrar em contato apenas com material estéril.
Técnica estéril passo a passo na reconstituição de peptídeos
O método básico de reconstituição, incluindo o cálculo de concentração, está explicado no nosso guia sobre como reconstituir peptídeos. Os passos a seguir acrescentam a disciplina asséptica a esse método:
Deixe o frasco de peptídeo atingir a temperatura ambiente dentro da caixa fechada. Abrir um frasco frio puxa umidade do ar para dentro do pó.
Remova as tampas de alumínio com aba dos dois frascos. A rolha de borracha por baixo não é estéril na parte externa.
Passe um swab com álcool novo em cada rolha e deixe o álcool secar completamente. Isso leva cerca de 30 segundos.
Abra a seringa e acople a agulha sem tocar na ponta ou no cone da agulha.
Aspire ar para a seringa em volume igual ao do solvente, insira a agulha pela rolha do solvente e injete o ar. Isso equaliza a pressão.
Aspire o solvente lentamente e remova as bolhas de ar enquanto a agulha ainda estiver no frasco.
Insira a agulha no frasco de peptídeo em ângulo, com o bisel voltado para o vidro, e deixe o solvente escorrer pela parede interna. Não o borrife sobre o pó.
Retire a agulha e descarte-a imediatamente no recipiente para perfurocortantes.
Agite o frasco suavemente em movimentos circulares até o pó dissolver. Não sacuda.
Passe novamente um swab na rolha antes de armazenar o frasco e coloque uma tampa nova ou cobertura estéril sobre ela, se tiver.
Para cada retirada posterior, repita a sequência: swab, secagem, agulha e seringa novas, retirada, descarte, swab, armazenamento.
Filtrando a solução
Um filtro de seringa de 0,22 µm remove bactérias e esporos de fungos, mas não vírus nem endotoxinas. A filtração é útil quando a solução vai para cultura celular ou será armazenada por mais de algumas semanas. Aspire toda a solução para uma seringa estéril, acople o filtro e empurre a solução lentamente para dentro de um frasco estéril novo. Peptídeos podem aderir às membranas dos filtros, então use um filtro de baixa ligação proteica, como PVDF ou PES, e espere uma pequena perda de material. Para soluções que serão usadas em curto prazo, a filtração não é necessária.
Rotulagem e documentação
Um frasco sem rótulo é um frasco que você não consegue usar. Escreva o seguinte em cada frasco reconstituído:
Nome do peptídeo e número do lote, conforme o certificado de análise
Solvente e volume total adicionado
Concentração resultante em mg/mL
Data e hora da reconstituição
Suas iniciais
Registre os mesmos dados no caderno de laboratório. A USP 797 chama o limite de tempo de armazenamento de data de uso após preparo. Para um frasco de pesquisa em água bacteriostática a 2 a 8 °C, muitos laboratórios definem esse prazo em quatro semanas. As condições de armazenamento após a reconstituição estão no nosso guia sobre como armazenar peptídeos.
Fontes comuns de contaminação
A maioria dos frascos contaminados pode ser atribuída a alguns poucos erros:
Inserir a agulha antes que o álcool na rolha tenha secado
Tocar a agulha ou a ponta da seringa com o dedo ou contra a bancada
Reutilizar uma seringa ou agulha para uma segunda retirada
Deixar o frasco destampado sobre a bancada
Usar um frasco de solvente que está aberto há meses
Uma solução turva, partículas visíveis ou uma película na superfície são sinais de contaminação. Não use esse frasco. Descarte-o e reconstitua um novo. Os produtos da nossa linha de peptídeos testados em laboratório vêm com um certificado que mostra a pureza do lote no momento do teste. A técnica estéril mantém a solução nessa qualidade depois que você abre o frasco.
Perguntas frequentes sobre técnica estéril para peptídeos
Posso usar álcool 70% em spray em vez de swabs?
Quantas vezes posso perfurar um frasco multidose de água bacteriostática?
O filtro de 0,22 µm remove endotoxinas?
Fontes
United States Pharmacopeia. General Chapter 797: Pharmaceutical Compounding, Sterile Preparations. usp.org/compounding/general-chapter-797
Austin PD, Elia M. A systematic review and meta-analysis of the risk of microbial contamination of aseptically prepared doses in different environments. Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 2009. DOI 10.18433/J3JP4B
Este artigo descreve o manuseio laboratorial de compostos de pesquisa. Todos os produtos deste site são vendidos somente para uso em pesquisa laboratorial e não se destinam ao uso humano ou veterinário.
