Como armazenar peptídeos: pó liofilizado e soluções reconstituídas

A forma como armazena os peptídeos determina durante quanto tempo continuam utilizáveis no laboratório. Um peptídeo é uma cadeia de aminoácidos, e esta cadeia é sensível ao calor, à água, à luz e ao oxigénio. Um frasco selado de pó liofilizado pode manter-se estável durante anos em condições adequadas. O mesmo peptídeo em solução pode perder qualidade em poucas semanas. Este guia explica as condições de armazenamento para as duas formas, o prazo de validade típico, o que acontece durante o envio e como reconhecer um peptídeo degradado.

Porque é que deve armazenar os peptídeos com cuidado

Os peptídeos degradam-se através de um pequeno número de reações químicas. As mais importantes são a hidrólise (a cadeia é cortada pela água), a oxidação (sobretudo da metionina, da cisteína e do triptofano), a desamidação (a asparagina e a glutamina perdem o seu grupo amida) e a agregação (as moléculas de peptídeo aderem umas às outras). Manning, Patel e Borchardt descreveram estas vias numa revisão publicada na Pharmaceutical Research em 1989 (DOI 10.1023/A:1015929109894). Cada reação ocorre mais depressa a temperaturas mais altas e na presença de água. Uma temperatura baixa e um estado seco abrandam todas elas ao mesmo tempo.

É por isso que os peptídeos de investigação são enviados como pó liofilizado. A água foi removida, pelo que a hidrólise e o crescimento microbiano quase param. Lai e Topp mostraram no Journal of Pharmaceutical Sciences em 1999 que os peptídeos e as proteínas no estado sólido continuam a degradar-se lentamente e que a humidade residual é o principal fator que controla esta velocidade (DOI 10.1021/js980374e). O armazenamento em seco não é, portanto, opcional. É a medida mais eficaz que pode tomar.

Como armazenar os peptídeos em pó liofilizado

Um frasco selado de peptídeo liofilizado é a forma mais estável com que vai trabalhar. As condições seguintes são padrão nos laboratórios de peptídeos:

• Armazenamento a longo prazo: -20 °C num congelador sem ciclos automáticos de descongelação. Muitos laboratórios usam -80 °C para peptídeos que contêm cisteína, metionina ou triptofano.

• Armazenamento a curto prazo: 2 a 8 °C num frigorífico é aceitável durante algumas semanas, por exemplo para um frasco que vai reconstituir em breve.

• Luz: mantenha o frasco na sua caixa ou num recipiente opaco. O triptofano e a tirosina absorvem a luz UV e podem oxidar-se.

• Humidade: mantenha o frasco selado até à utilização. Guarde-o com um saquinho dessecante se o seu congelador tiver humidade elevada.

O pó liofilizado é higroscópico. Atrai água do ar. Se abrir um frasco frio, a água do ambiente condensa sobre o pó em poucos segundos. Deixe sempre o frasco atingir a temperatura ambiente antes de retirar a tampa. Isto demora cerca de 15 a 20 minutos para um frasco padrão de 3 mL.

Como armazenar os peptídeos após a reconstituição

Depois de dissolver o pó, o peptídeo fica em contacto com a água e as reações de degradação começam. O solvente que escolher é importante. A água bacteriostática contém 0,9% de álcool benzílico, que impede o crescimento bacteriano num frasco aberto várias vezes. Não impede a degradação química. Pode ler o método completo no nosso guia sobre como reconstituir peptídeos, e encontra o solvente na nossa coleção de água bacteriostática e consumíveis de laboratório.

Para uma solução reconstituída, aplicam-se as seguintes regras:

• Guarde o frasco a 2 a 8 °C no frigorífico, nunca à temperatura ambiente.

• Mantenha o frasco na vertical para que a solução não toque na rolha de borracha durante longos períodos.

• Proteja a solução da luz. Uma pequena caixa de cartão no frigorífico é suficiente.

• Escreva no rótulo o nome do peptídeo, a concentração e a data de reconstituição.

• Planeie utilizar a solução em poucas semanas. Muitos peptídeos em água bacteriostática são normalmente usados em cerca de quatro semanas a 2 a 8 °C. Alguns são mais sensíveis, por isso verifique o peptídeo específico.

Ciclos de congelação e descongelação e fracionamento em alíquotas

É possível congelar uma solução, mas cada ciclo de congelação e descongelação stressa o peptídeo. Durante a congelação, formam-se cristais de gelo e o peptídeo fica concentrado nas pequenas bolsas de líquido entre eles. Isto altera localmente o pH e a concentração de sais e favorece a agregação. Durante a descongelação acontece o oposto. Um ciclo é normalmente aceitável. Cinco ciclos não são.

A solução é fracionar em alíquotas. Divida o peptídeo reconstituído em pequenas porções que correspondam ao volume necessário para uma experiência. Congele as alíquotas uma única vez a -20 °C ou abaixo. Descongele uma alíquota quando precisar dela e descarte o restante. Este método evita que a solução-mãe seja aquecida e arrefecida repetidamente. Use tubos estéreis de baixa adsorção, porque os peptídeos podem aderir às superfícies de plástico. Identifique cada tubo, e não apenas a caixa.

Prazo de validade típico quando armazena os peptídeos corretamente

O prazo de validade exato depende da sequência. Os peptídeos com cisteína, metionina, triptofano, asparagina ou glutamina degradam-se mais depressa. As sequências curtas e simples duram mais. Os valores seguintes são orientações típicas para peptídeos de investigação e não uma garantia:

• Liofilizado, selado, -20 °C: vários anos

• Liofilizado, selado, 2 a 8 °C: de meses a cerca de um ano

• Liofilizado, temperatura ambiente: semanas, adequado apenas para transporte

• Reconstituído em água bacteriostática, 2 a 8 °C: cerca de quatro semanas para muitos peptídeos

• Reconstituído, congelado uma vez em alíquotas: alguns meses

Um peptídeo como o BPC-157 é relativamente robusto na forma de pó. Um complexo de cobre como o GHK-Cu também é estável em pó, mas deve ser protegido da luz após a reconstituição. O certificado de análise indica a pureza na data do teste, e não na data de utilização. A forma de ler este documento está explicada no nosso artigo sobre como ler o certificado de análise de um peptídeo.

Estabilidade durante o envio

Muitos investigadores perguntam se um peptídeo sobrevive a alguns dias nos correios sem refrigeração. Para o pó liofilizado num frasco selado, a resposta é normalmente sim. O estado seco abranda tanto a degradação que um tempo de trânsito de vários dias à temperatura ambiente tem muito pouco efeito sobre a pureza. É por isso que os fornecedores enviam o pó, por regra, sem acumuladores de frio. Coloque os frascos no congelador ou no frigorífico no dia em que a encomenda chegar. Não deixe a encomenda numa divisão quente, num carro ou ao sol direto.

As soluções reconstituídas não devem ser enviadas. Se tiver de transportar uma solução entre laboratórios, use uma caixa isotérmica com acumuladores de frio e mantenha o tempo de trânsito curto.

Sinais de degradação

A maior parte da degradação química não é visível a olho nu. A oxidação e a desamidação alteram a molécula, mas não o aspeto do pó. Ainda assim, alguns sinais visíveis devem levá-lo a parar e verificar:

• O pó transformou-se numa película pegajosa ou numa gota vítrea no fundo do frasco. Isto aponta para absorção de humidade.

• O pó mudou de cor, por exemplo de branco para amarelo.

• Uma solução reconstituída está turva, apresenta partículas ou formou um gel. Isto aponta para agregação ou contaminação.

• A solução não se dissolve completamente, mesmo após agitação suave.

• O selo do frasco foi quebrado ou a rolha está solta.

Se observar algum destes sinais, não utilize o frasco numa experiência que dependa de uma concentração conhecida. Quando for importante, confirme a pureza por HPLC. O nosso artigo sobre pureza de peptídeos, HPLC e espectrometria de massa explica o que mostra este teste.

Perguntas frequentes sobre como armazenar peptídeos

Fontes

• Manning MC, Patel K, Borchardt RT. Stability of protein pharmaceuticals. Pharmaceutical Research. 1989. DOI 10.1023/A:1015929109894

• Lai MC, Topp EM. Solid-state chemical stability of proteins and peptides. Journal of Pharmaceutical Sciences. 1999. DOI 10.1021/js980374e

Este artigo descreve o manuseamento laboratorial de compostos de investigação. Todos os produtos deste site são vendidos exclusivamente para utilização em investigação laboratorial e não se destinam a uso humano ou veterinário.