Tehnica sterilă la reconstituirea peptidelor

Tehnica sterilă la reconstituirea peptidelor protejează două lucruri: peptidul din flacon și validitatea rezultatelor tale. O soluție de peptid reconstituită este deschisă în mod repetat timp de câteva săptămâni. Fiecare străpungere a dopului este o șansă ca bacterii, spori fungici, praf sau celule de piele să pătrundă. Odată ajunse înăuntru, acestea se înmulțesc, consumă peptidul și eliberează enzime și endotoxine care denaturează orice test. Acest ghid descrie un flux de lucru aseptic practic pentru un laborator de cercetare, materialele necesare, sursele comune de contaminare și standardul care definește bunele practici.

De ce contează tehnica sterilă la reconstituirea peptidelor

Peptidele liofilizate sunt expediate în flacoane sigilate, umplute în condiții controlate. Riscul apare în momentul în care deschizi sistemul. Adaugi solvent prin dop, extragi soluție prin dop și faci ambele operațiuni pe un blat de lucru, în aer, cu praf și suprafețe pline de microorganisme. Apa bacteriostatică conține 0,9% alcool benzilic, care încetinește creșterea bacteriană, dar nu omoară totul și nu are niciun efect asupra enzimelor deja prezente în flacon.

Austin și Elia au analizat datele publicate privind contaminarea microbiană a dozelor preparate aseptic în Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, în 2009 (DOI 10.18433/J3JP4B). Preparatele realizate într-un mediu necontrolat au fost contaminate mult mai des decât cele realizate într-un dulap cu flux laminar sau într-o cameră curată. Mediul și tehnica, nu solventul, determină dacă un flacon rămâne curat.

USP 797 ca standard de referință

Farmacopeea Statelor Unite publică standardul pentru preparatele sterile în Capitolul general 797 USP. Acesta este scris pentru farmacii, nu pentru laboratoare de cercetare, iar multe dintre cerințele sale, cum ar fi camerele curate certificate și monitorizarea mediului, depășesc ceea ce are nevoie un mediu de cercetare. Rămâne totuși cea mai bună referință, deoarece descrie logica lucrului aseptic: curățarea mâinilor, curățarea suprafețelor, controlul aerului, dezinfectarea fiecărui loc critic, nicio atingere a oricărui lucru care va intra în contact cu produsul și limitarea timpului în care un preparat este păstrat. Secțiunile despre igiena mâinilor, îmbrăcarea, dezinfectarea locurilor critice și datarea de utilizare sunt direct utile.

Pregătirea unui spațiu de lucru curat

Locația ideală este un dulap cu flux laminar. Dacă nu ai unul, alege un blat departe de uși, ferestre, chiuvete și trafic intens, și oprește ventilatoarele care suflă peste suprafață. Apoi pregătește spațiul:

• Golește blatul de tot ce nu este necesar pentru operațiune.

• Șterge suprafața cu alcool izopropilic 70% și lasă-l să se usuce.

• Spală-ți mâinile cu săpun timp de cel puțin 30 de secunde și uscă-le cu un prosop de hârtie curat.

• Îmbracă mănuși noi din nitril și șterge mănușile cu alcool.

• Prinde-ți părul și poartă un halat de laborator cu mânecile închise.

• Așază toate materialele înainte de a deschide ceva.

Nu vorbi, nu tuși și nu te apleca peste materialele deschise.

Materiale pentru reconstituirea sterilă a peptidelor

Tot ce intră în contact cu solventul sau cu soluția trebuie să fie steril și folosit o singură dată. Lista este scurtă:

• Seringi sterile de unică folosință într-o dimensiune potrivită volumului, de exemplu 1 mL sau 3 mL. Deschide ambalajul doar imediat înainte de utilizare.

• Ace sterile de unică folosință, unul pentru extragerea solventului și unul nou pentru fiecare extragere ulterioară. Un ac folosit o dată nu mai este steril.

• Tampoane sterile cu alcool, ambalate individual.

• Apă bacteriostatică într-un flacon multidoză sigilat, cum ar fi apa bacteriostatică 10 mL din oferta noastră. Gama completă de solvenți și consumabile se găsește în colecția noastră apă bacteriostatică și consumabile de laborator.

• Un filtru steril pentru seringă de 0,22 µm, opțional, pentru soluțiile care vor fi folosite în cultură celulară sau depozitate o perioadă mai lungă.

• Etichete, marker permanent și un container pentru obiecte ascuțite.

Nu refolosi niciodată o seringă, nici măcar pentru același flacon în aceeași zi. Nu atinge niciodată tija acului, vârful seringii sau interiorul unui capac. Aceste suprafețe se numesc locuri critice și trebuie să intre în contact doar cu materiale sterile.

Tehnica sterilă pas cu pas la reconstituirea peptidelor

Metoda de bază de reconstituire, inclusiv calculul concentrației, este explicată în ghidul nostru despre cum se reconstituie peptidele. Pașii următori adaugă disciplina aseptică peste această metodă:

1. Lasă flaconul de peptid să ajungă la temperatura camerei în cutia sa închisă. Deschiderea unui flacon rece atrage umiditatea din aer în pulbere.

2. Îndepărtează capacele detașabile de pe ambele flacoane. Dopul de cauciuc de dedesubt nu este steril la exterior.

3. Șterge fiecare dop cu un tampon nou cu alcool și lasă alcoolul să se usuce complet. Acest lucru durează aproximativ 30 de secunde.

4. Deschide seringa și fixează acul fără a atinge vârful sau baza acului.

5. Trage aer în seringă egal cu volumul de solvent, introdu acul prin dopul flaconului cu solvent și împinge aerul înăuntru. Acest lucru egalizează presiunea.

6. Extrage solventul lent și elimină bulele de aer cât acul este încă în flacon.

7. Introdu acul în flaconul cu peptid sub un unghi, cu tăietura orientată spre sticlă, și lasă solventul să curgă pe peretele interior. Nu-l pulveriza pe pulbere.

8. Scoate acul și aruncă-l imediat în containerul pentru obiecte ascuțite.

9. Rotește ușor flaconul până când pulberea se dizolvă. Nu agita.

10. Șterge din nou dopul înainte de a depozita flaconul și pune un capac nou sau o copertă sterilă peste el, dacă ai una.

Pentru fiecare extragere ulterioară, repetă secvența: tamponează, lasă să se usuce, folosește ac și seringă noi, extrage, aruncă, tamponează, depozitează.

Filtrarea soluției

Un filtru pentru seringă de 0,22 µm elimină bacteriile și sporii fungici, dar nu și virusurile sau endotoxinele. Filtrarea este utilă atunci când soluția merge în cultură celulară sau va fi depozitată mai mult de câteva săptămâni. Extrage întreaga soluție într-o seringă sterilă, fixează filtrul și împinge soluția lent într-un flacon steril nou. Peptidele pot adera la membranele filtrelor, așa că folosește un filtru cu legare redusă a proteinelor, cum ar fi PVDF sau PES, și așteaptă-te la o mică pierdere de material. Pentru soluțiile pe care le folosești într-un interval scurt, filtrarea nu este necesară.

Etichetare și documentare

Un flacon fără etichetă este un flacon pe care nu îl poți folosi. Scrie următoarele pe fiecare flacon reconstituit:

• Numele peptidului și numărul lotului din certificatul de analiză

• Solventul și volumul total adăugat

• Concentrația rezultată în mg/mL

• Data și ora reconstituirii

• Inițialele tale

Notează aceleași date în caietul de laborator. USP 797 numește limita timpului de depozitare data de utilizare. Pentru un flacon de cercetare în apă bacteriostatică, la 2 până la 8 °C, multe laboratoare stabilesc această limită la patru săptămâni. Condițiile de depozitare după reconstituire sunt acoperite în ghidul nostru despre cum se depozitează peptidele.

Surse comune de contaminare

Majoritatea flacoanelor contaminate pot fi urmărite până la una dintre câteva greșeli:

• Introducerea acului înainte ca alcoolul de pe dop să se fi uscat

• Atingerea acului sau a vârfului seringii cu degetul sau de blat

• Refolosirea unei seringi sau a unui ac pentru o a doua extragere

• Lăsarea flaconului descoperit pe blat

• Folosirea unui flacon de solvent care a stat deschis luni de zile

O soluție tulbure, particulele vizibile sau o peliculă la suprafață sunt semne de contaminare. Nu folosi un astfel de flacon. Aruncă-l și reconstituie unul nou. Produsele din gama noastră de peptide testate în laborator vin cu un certificat care arată puritatea lotului la momentul testării. Tehnica sterilă menține soluția la acest nivel de calitate și după ce o deschizi.

Întrebări frecvente despre tehnica sterilă pentru peptide

Surse

• United States Pharmacopeia. General Chapter 797: Pharmaceutical Compounding, Sterile Preparations. usp.org/compounding/general-chapter-797

• Austin PD, Elia M. A systematic review and meta-analysis of the risk of microbial contamination of aseptically prepared doses in different environments. Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 2009. DOI 10.18433/J3JP4B

Acest articol descrie manipularea de laborator a compușilor de cercetare. Toate produsele de pe acest site sunt vândute exclusiv pentru utilizare în cercetare de laborator și nu sunt destinate uzului uman sau veterinar.