Steril teknik vid rekonstituering av peptider
Steril teknik vid rekonstituering av peptider skyddar två saker: peptiden i injektionsflaskan och giltigheten i dina resultat. En rekonstituerad peptidlösning öppnas upprepade gånger under flera veckor. Varje punktering av proppen är ett tillfälle för bakterier, svampsporer, damm eller hudceller att komma in. Väl inne växer de, förbrukar peptiden och frisätter enzymer och endotoxiner som förvränger alla analyser. Den här guiden beskriver ett praktiskt aseptiskt arbetsflöde för ett forskningslaboratorium, de material du behöver, de vanligaste källorna till kontaminering och standarden som definierar god praxis.
Steril teknik vid rekonstituering av peptider
Steril teknik vid rekonstituering av peptider skyddar två saker: peptiden i injektionsflaskan och giltigheten i dina resultat. En rekonstituerad peptidlösning öppnas upprepade gånger under flera veckor. Varje gång gummiproppen punkteras finns en risk att bakterier, svampsporer, damm eller hudceller tar sig in. Väl inne växer de, bryter ner peptiden och frigör enzymer och endotoxiner som förvränger alla analyser. Den här guiden beskriver ett praktiskt aseptiskt arbetsflöde för ett forskningslaboratorium, de material du behöver, de vanligaste källorna till kontamination och den standard som definierar god praxis.
Varför steril teknik är viktig vid peptidrekonstituering
Frystorkade peptider skickas i förseglade injektionsflaskor som fyllts under kontrollerade förhållanden. Risken börjar när du öppnar systemet. Du tillsätter lösningsmedel genom proppen, du drar upp lösning genom proppen, och du gör båda på en bänk med luft, damm och ytor fulla av mikroorganismer. Bakteriostatiskt vatten innehåller 0,9 % bensylalkohol, vilket bromsar bakterietillväxten, men det dödar inte allt och det verkar inte mot enzymer som redan finns i flaskan.
Austin och Elia granskade den publicerade datan om mikrobiell kontamination av aseptiskt beredda doser i Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences 2009 (DOI 10.18433/J3JP4B). Beredningar som gjordes i en okontrollerad miljö kontaminerades betydligt oftare än de som gjordes i ett laminärflödesskåp eller ett renrum. Miljön och tekniken, inte lösningsmedlet, avgör om en flaska förblir ren.
USP 797 som referensstandard
United States Pharmacopeia publicerar standarden för sterila beredningar i USP General Chapter 797. Den är skriven för apotek, inte för forskningslaboratorier, och många av kraven, till exempel certifierade renrum och miljöövervakning, går längre än vad en forskningsmiljö behöver. Den är ändå den bästa referensen eftersom den beskriver logiken i aseptiskt arbete: rengör händerna, rengör ytorna, kontrollera luften, desinficera varje kritisk yta, rör aldrig något som kommer i kontakt med produkten och begränsa hur länge en beredning får förvaras. Avsnitten om handhygien, klädsel, desinfektion av kritiska ställen och användningsdatum är direkt användbara.
Så förbereder du en ren arbetsyta
Den bästa platsen är ett laminärflödesskåp. Om du inte har ett sådant väljer du en bänk långt från dörrar, fönster, handfat och genomgångstrafik, och stänger av fläktar som blåser över ytan. Förbered sedan utrymmet:
Töm bänken på allt som inte behövs för uppgiften.
Torka av ytan med 70 % isopropylalkohol och låt den torka.
Tvätta händerna med tvål i minst 30 sekunder och torka dem med en ren pappersduk.
Ta på nya nitrilhandskar och torka av handskarna med alkohol.
Binda upp håret och bär en laboratorierock med slutna ärmar.
Lägg fram alla material innan du öppnar något.
Tala inte, hosta inte och luta dig inte över de öppna materialen.
Material för steril peptidrekonstituering
Allt som kommer i kontakt med lösningsmedlet eller lösningen måste vara sterilt och användas en gång. Listan är kort:
Sterila engångssprutor i en storlek som passar volymen, till exempel 1 ml eller 3 ml. Öppna förpackningen först precis före användning.
Sterila engångskanyler, en för att dra upp lösningsmedel och en ny för varje senare uttag. En kanyl som använts en gång är inte längre steril.
Sterila alkoholkompresser, var och en förpackad för sig.
Bakteriostatiskt vatten i en försluten flerdosflaska, till exempel vårt bakteriostatiska vatten 10 ml. Hela sortimentet av lösningsmedel och förbrukningsmaterial finns i vår kollektion bakteriostatiskt vatten och laboratorieförbrukning.
Ett sterilt sprutfilter på 0,22 µm, valfritt, för lösningar som ska användas i cellodling eller förvaras under längre tid.
Etiketter, en permanentpenna och en behållare för vassa föremål.
Återanvänd aldrig en spruta, inte ens för samma flaska samma dag. Rör aldrig kanylskaftet, sprutspetsen eller insidan av en kapsyl. Dessa ytor kallas kritiska ställen och får endast komma i kontakt med sterilt material.
Steg-för-steg-steril teknik vid rekonstituering av peptider
Den grundläggande rekonstitueringsmetoden, inklusive koncentrationsberäkningen, förklaras i vår guide om hur du rekonstituerar peptider. Följande steg lägger till den aseptiska disciplinen ovanpå den metoden:
Låt peptidflaskan nå rumstemperatur i sin stängda ask. Om du öppnar en kall flaska dras fukt från luften in i pulvret.
Ta bort de avtagbara locken från båda flaskorna. Gummiproppen under är inte steril på utsidan.
Torka av varje propp med en ny alkoholkompress och låt alkoholen torka helt. Detta tar cirka 30 sekunder.
Öppna sprutan och fäst kanylen utan att röra spetsen eller kanylfästet.
Dra in luft i sprutan motsvarande lösningsmedlets volym, för in kanylen genom lösningsmedlets propp och tryck in luften. Detta jämnar ut trycket.
Dra upp lösningsmedlet långsamt och avlägsna luftbubblor medan kanylen fortfarande sitter i flaskan.
För in kanylen i peptidflaskan i en vinkel, med avfasningen vänd mot glaset, och låt lösningsmedlet rinna längs insidan av väggen. Spruta inte på pulvret.
Dra ut kanylen och kassera den direkt i behållaren för vassa föremål.
Snurra försiktigt runt flaskan tills pulvret har löst sig. Skaka inte.
Torka av proppen igen innan du förvarar flaskan, och sätt på ett nytt lock eller ett sterilt skydd om du har ett.
För varje senare uttag upprepar du sekvensen: torka av, låt torka, ny kanyl och spruta, dra upp, kassera, torka av, förvara.
Filtrering av lösningen
Ett sprutfilter på 0,22 µm avlägsnar bakterier och svampsporer men inte virus eller endotoxiner. Filtrering är användbart när lösningen ska användas i cellodling eller förvaras längre än några veckor. Dra upp hela lösningen i en steril spruta, sätt på filtret och tryck långsamt ut lösningen i en ny steril flaska. Peptider kan adsorberas till filtermembran, så använd ett filter med låg proteinbindning, till exempel PVDF eller PES, och räkna med en liten förlust av material. För lösningar som används inom kort tid krävs ingen filtrering.
Märkning och dokumentation
En flaska utan etikett är en flaska du inte kan använda. Skriv följande på varje rekonstituerad flaska:
Peptidens namn och batchnummer från analyscertifikatet
Tillsatt lösningsmedel och total volym
Resulterande koncentration i mg/ml
Datum och klockslag för rekonstitueringen
Dina initialer
För samma uppgifter i din laboratoriedagbok. USP 797 kallar gränsen för förvaringstid för användningsdatum. För en forskningsflaska med bakteriostatiskt vatten vid 2 till 8 °C sätter många laboratorier denna gräns till fyra veckor. Förvaringsförhållanden efter rekonstituering behandlas i vår guide om hur du förvarar peptider.
Vanliga källor till kontamination
De flesta kontaminerade flaskor kan spåras till ett fåtal misstag:
Att föra in kanylen innan alkoholen på proppen har torkat
Att röra kanylen eller sprutspetsen med fingret eller mot bänken
Att återanvända en spruta eller kanyl för ett andra uttag
Att lämna flaskan oförsluten på bänken
Att använda en lösningsmedelsflaska som har varit öppen i månader
En grumlig lösning, synliga partiklar eller en hinna på ytan är tecken på kontamination. Använd inte en sådan flaska. Kassera den och rekonstituera en ny. Produkter i vårt sortiment laboratorietestade peptider levereras med ett certifikat som visar satsens renhet vid testtillfället. Steril teknik håller lösningen på den kvaliteten även efter att du öppnat den.
Vanliga frågor om steril teknik för peptider
Kan jag använda en 70 % etanolspray i stället för kompresser?
Hur många gånger kan jag punktera en flerdosflaska med bakteriostatiskt vatten?
Avlägsnar filtret på 0,22 µm endotoxiner?
Källor
United States Pharmacopeia. General Chapter 797: Pharmaceutical Compounding, Sterile Preparations. usp.org/compounding/general-chapter-797
Austin PD, Elia M. A systematic review and meta-analysis of the risk of microbial contamination of aseptically prepared doses in different environments. Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 2009. DOI 10.18433/J3JP4B
Den här artikeln beskriver laboratoriehantering av forskningssubstanser. Alla produkter på den här webbplatsen säljs endast för laboratorieforskning och är inte avsedda för human- eller veterinärmedicinsk användning.
